新奇のCOP气Tブユニット様タンパク質の構造と機能
【目的】
真核細胞において、粗面小胞体で合成された分泌タンパク質はゴルジ装置、トランスゴルジ ネットワーク（TGN)を経て分泌される。この分泌経路における各オルガネラ間のタンパク質 輸送は輸送小胞を介して行われる。輸送小胞の表面は特異的なコートタンパク質複合体で覆わ れているが、近年いくつかのコートタンパク質複合体の実体や機能が明らかになってきた。 コートタンパク質複合体の一つであるCOP气Rートタンパク質は七つのサブユニット（α、 β、β’、γ、δ、ε、ζ）からなる複合体であり、ゴルジ体から小胞体への逆行輸送に関与 していると考えられる。最近、当研究室でこのCOP泄｡合体のうち、γ-COPに相同性を示す タンパク質をコードするcDNAをクローニングし、既知のものをγ1-COP、新奇のものをγ2 -ＣＯＰと命名した。 そこで、本研究では新奇のγ2-COPについて細胞内における局在と機能を明らかにすること を目的とした。
【方法】
1）細胞内局在の解析 γ1-COP、γ2-COPのcDNAをHAタグのついた動物細胞発現用のベクターに組み込み、ラッ ト肝細胞（Clone 9)に形質導入し、発現させた。HAを特異的に認識する抗体を用いた蛍光抗体 法により細胞内局在を調べた。また、薬剤処理を行いγ1-COP、γ2-COPの局在の変化を調べ た。
2）積み荷タンパク質（ｐ23）との相互作用の解析 積み荷タンパク質であるｐ23の細胞質領域とGSTとの融合タンパク質を精製した。このGST 融合タンパク質とγ1-COP、γ2-COP を発現させたClone 9細胞の抽出液を用いてpull down assay を行った。
【結果と考察】
蛍光抗体法によりγ2-COPはゴルジ体に局在することがわかった。また、γ1-COPとγ2 -COPの薬剤処理による影響の違いを比較したが、違いはみられなかった。 pull down assayにより、γ1-COPと同様にγ2-COPもp23に結合することがわかった。 ｐ23にはCOP氓ｪ認識して結合するモチーフが二つあるが、そのモチーフに変異を導入した ものを作製しγ2-COPがどのモチーフと相互作用しているのかを解析していく予定である。 また、γ2-COPがCOP气^ンパク質複合体の他のどのサブユニットと結合しているのかを 調べるために酵母のtwo-hybrid systemや免疫沈殿法を行っていく予定である。