導入・目的：Ｘ連鎖リンパ 増殖性症候群（ＸＬＰ）はEBウイルスに感染性単核症を発症し、未感染時においても低ガン マグロブリン血症、悪性リンパ腫を呈する遺伝子疾患である。近年の分子生物学的解 析により、ＸＬＰの患者の原因遺伝子がＴ細胞、ＮＫ細胞の細胞内シグナル伝達に関 与すＳＡＰ（ＳＬＡＭ associated protein）遺伝子の異常にあることが報告され た。ＸＬＰの患者では、ヘルパーＴ細胞からのインターフェロンγの産生に欠陥、 EBウイ ルスに対するＣＴＬの欠如、ＮＫ細胞のKilling 活性の欠如などが報告されてい ることからSAPはＴ細胞とＢ細胞のInteractionを介したシグナル伝達、Ｎ Ｋ細胞の活性化などに関与している可能性がありＸＬＰの患者ではその pathwayに欠陥があることが示唆されている。XLPの遺伝子治療は、ヒトの正常な SAP遺伝 子をウイルスベクターを用いて患者血球細胞に導入することにより、EBウイルスに対するＣ ＴＬの誘導、ＮＫ細胞のkilling活性の回復などを目標としてい る。我々の実験ではその基礎実験のためのウイルスベクターの作製とパッケージャー 細胞の樹立を目的としている。

ウイルスベクター：使用す るレトロウイルスベクターＧＣsapの特徴として、１）一般にレトロウ イルスベクターで使われるＭＬＶのＬＴＲのかわりに、メチル化されにくいＭＳＣＶ のＬＴＲをを用いることにより長期での発現を期待することができること。２）ウイ ルス本来のsplice donor /acceptor sequenceを保有していているので、転写効率の 良いspliced subgenomic RNAの産生が可能であること。３）ＧＦＰを選択遺伝子として持つ ので遺伝子導入細胞のFACSによる解析、収集が可能であることなどが挙げられる。

ＦＬＹＲＤ１８：ＨＴ１０８０細胞由来　ＣＡＴの Envを発 現

ＦＬＹＡ１３：　ＨＴ１０８０細胞由来　Amphotropicの Envを発 現

ＰＧ１３：　　　ＮＩＨ３Ｔ３細胞由来　GaLVのEnvを発現

GCsapにSAP遺伝子をクローニングする（G C sap/SAP）。このベクターを リン酸カルシウム法を用いてFLYRD18にtransfectionし、一過性に発現したリ コンビナントレトロウイルスをもちいてFLYA13及びPG13に順次感染させる。最終的に、 FACSを 用いたＧＦＰ陽性細胞の Singl Cell Sortingと、その培養上清を用いた RNA Dot Blotにより、高力価のＰＧ１３／ＧＣsap SAP クローンを樹立する。

現在の進行状況及び今後の方針： ＧＣsap/SAP の作製を終了。ＲＤ１８に Transfection を行いＧＦＰ陽性細胞をFACSによりSortingした。現在その上清を用い てPG13,A13に感染中である。今後パッケージャー細胞が出来次第、Hela, Baf/3, 患 者Ｔ細胞株に SAP遺伝子を導入し、サザンブロット、ウエスタンブロットで SAPの mRNA,タンパク質レベルでの発現を確認する。また,SAPを導入した患者ＮＫ細胞で Killing Assayを行い活性化能力の回復が見られるかも確認する予定である。